Сайт для врачей и фармацевтов
Карта сайта Сделать стартовой Добавить в избранное
Loading
День борьбы с наркоманией
ЛогинПарольЗапомнить
Ожирение и бронхиальная астма

Анализ генетических основ различных заболеваний является наиболее стремительно развивающимся направлением современной науки...


Сезонозависимая осеннее-весенняя кластерная головная боль

Термин предложен Международным обществом головной боли (МОГБ). Слово «кластер» происходит от английского «cluster» - «пучок», отражая ощущения во время приступа боли...


Управление геном обратило вспять старение организма

Генно-инженерная активация фермента, который защищает концы хромосом, привела к восстановлению нормальной работы деградировавших органов. Среди прочего были достигнуты возврат репр..


Кто на самом деле открыл WPW-синдром?

Различают WPW-феномен и WPW-синдром. Частота встречаемости первого - до 3%, второго - до 0,2%...


Имплантация межпозвоночных дисков заменит артродез

Спинальная хирургия, стремительно развиваясь в последние годы, стала действительно реконструктивной. Одно из перспективных направлений - имплантация искусственных межпозвоночных ди..


Перемежающаяся хромота: лечебная тактика практикующего врача

Установлено, что именно атеросклероз является причиной поражения периферических артерий в 80–90% случаев [3], остальную часть составляет «чистая» диабетическая..


Внезапная смерть

Проблема внезапной смерти, которая обсуждается на симпозиуме, представляется важнейшей для здравоохранения многих стран мира. Это подтверждается тем фактом, что, когда в начале 70-..


Новые вспомогательные репродуктивные методы позволяют полностью очищать сперматозоиды от РНК ВИЧ и провирусной ДНК спермы ВИЧ+ мужчин. Новые вспомогательные репродуктивные методы позволяют полностью очищать сперматозоиды от РНК ВИЧ и провирусной ДНК спермы ВИЧ+ мужчин.

Новые вспомогательные репродуктивные методы позволяют полностью очищать сперматозоиды от РНК ВИЧ и провирусной ДНК спермы ВИЧ+ мужчин.

Полная очистка спермы от РНК ВИЧ-1 и провирусной ДНК с использованием метода всплытия. Вспомогательные репродуктивные технологии с использованием очищенных от ВИЧ-1 сперматозоидов.

AIDS. Volume 20(7), 24 April 2006. p.967-973
СПИД. Выпуск 20 (7), 24 апреля 2006 года, стр.967-973

В настоящем исследовании было продемонстрировано, что очистка сперматозоидов из спермы ВИЧ-инфицированных мужчин от РНК ВИЧ-1 и провирусной ДНК возможна. При этом важно подчеркнуть, что отсутствие РНК ВИЧ-1 и провирусной ДНК в обработанной методом всплытия сперме для использования вспомогательных методов репродукции было подтверждено самыми чувствительными тестами.

Все женщины, которым применялись вспомогательные методы репродукции, даже те, кто удачно не забеременел, прошли тестирование на антитела к РНК ВИЧ-1 и провирусной ДНК в крови через 1 месяц и 3 месяца, а также сразу после родов. Определение РНК ВИЧ-1 и провирусной ДНК проводилось в пупочной крови детей при рождении и через 6 месяцев после рождения.

Авторы:

Kato, Shingoa; Hanabusa, Hidejic; Kaneko, Satorud; Takakuwa, Koichie; Suzuki, Minae; Kuji, Naoakib; Jinno, Masaof; Tanaka, Riea; Kojima, Kenichic; Iwashita, Mitsutoshif; Yoshimura, Yasunorib; Tanaka, Kenichie

Отделение микробиологии, школа медицины Университета Кейо, Токио, Япония Отделение акушерства и гинекологии, школа медицины Университета Кейо, Токио, Япония Отделение гематологии, больница Огикубо, Токио, Япония Отделение акушерства и гинекологии, Токийский стоматологический колледж, город Ичикава, префектура Чиба, Япония Отделение акушерства и гинекологии, Университет Ниигата, Ичибанкьё Асахимачидори Ниигата, префектура Ниигата, Япония Отделение акушерства и гинекологии, Университет Киорин, город Митака, Япония Абстракт

* Обоснование. Использование антиретровирусных препаратов снизило уровень смертности среди ВИЧ-инфицированных и многие ВИЧ дискордантные пары хотят иметь детей. ВИЧ-инфицированному мужчине можно иметь детей без риска передачи ВИЧ-инфекции, если очистить его сперму от ВИЧ-инфекции.

* Методы. Усовершенствованный метод всплытия был использован для получения не инфицированных ВИЧ-инфекцией сперматозоидов из спермы ВИЧ-инфицированных мужчин. Разбавленная сперма наслаивалась на градиент концентраций 30, 98%, после чего центрифугировалась.

* Результаты. После обработки спермы РНК ВИЧ-1 и провирусная ДНК не были обнаружены анализом полимеразной цепной реакции ни в одном из 73 собранных у 52 пациентов образцах. ВИЧ-1-отрицательная сперма была использована для ЭКО у 12 пар и для ИКСИ у 31 пары. Перед переносом эмбриона наличие РНК ВИЧ-1 или провирусной ДНК в питательной среде вновь обнаружено не было. Из 43 женщин 20 забеременели, родилось 27 детей. Антитела к ВИЧ, ВИЧ РНК и провирусная ДНК отсутствовали у всех женщин и детей.

* Выводы. Из спермы ВИЧ-положительных мужчин можно получить ВИЧ-отрицательные сперматозоиды. Данный метод не представляет никакой угрозы передачи ВИЧ женщинам и детям.

Результаты исследования

В настоящем исследовании принимали участие 52 ВИЧ-положительных человека (см. таблицу 1), из них 29 были инфицированы через кровь, 23 -половым путем. Средний возраст составил 33 года (от 27 до 44 лет) у 16 не проходивших лечения пациентов, 34 года (от 28 лет до 41 года) у получавших антиретровирусную терапию пациентов с вирусной нагрузкой <50 копий/мл и 32 года (от 20 лет до 51 года) у получавших HAART пациентов с вирусной нагрузкой <50 копий/мл. Средняя вирусная нагрузка в плазме составляла 17500 копий/мл (от 70-100000) в не получавшей лечение группе пациентов, и 1500 копий/мл (от 54-31000) у получавших лечение пациентов, вирусная нагрузка которых составляла <50 копий/мл. Среди 48 пациентов, средняя вирусная нагрузка в плазме составляла 17500 копий/мл (от 70-100000) у 15 пациентов в не получавшей лечение группе, 4800 копий/мл (от 54-31000) у 10 получавших антиретровирусную терапию пациентов с вирусной нагрузкой <50 копиймл, и < 50 копий/мл у 23 получавших HAART пациентов. Среднее число CD4 составляло 365 клеток/ N<50 копий/мл и 399 клеток/ N< 50 копий/мл. Среднее количество сперматозоидов у ВИЧ-положительных мужчин составляло 47х106/мл (от 0 до 82) в не получавшей лечение группе, 41 х106/мл (от 0 до 65) у получавших антиретровирусную терапию пациентов с вирусной нагрузкой < 50 копий/мл и 35 х106/мл (от 0 до 120) у получавших HAART пациентов с вирусной нагрузкой <50 копий/мл. Азооспермия была выявлена у четырех пациентов, которые в данное исследование включены не были. У всех пациентов средний показатель подвижности сперматозоидов составлял 28%, а средний процент морфологически нормальных сперматозоидов равнялся 12%. Средняя концентрация сперматозоидов у пациентов (за исключением четырех пациентов с азооспермией) составляла 42 х106/мл (от 3 до 120), и 52 х106/мл (от 0 до 170) сперматозоидов было получено методом перколярного центрифугирования. Средний показатель подвижности сперматозоидов равнялся 28% и 45% до и после метода перколяции, соответственно. После использования методавсплытия количество сперматозоидов составляло 1,5х106/мл (от 0 до 11), а показатель подвижности равнялся 100%. Методом всплытия удалось получить сперматозоиды из 73 образцов спермы у 48 пациентов. ВИЧ-1 РНК или провирусная ДНК не были обнаружены ни в одном случае. ВИЧ-1-отрицательная сперма использовалась для ЭКО у 12 пар и ИКСИ у 31 пары. ВИЧ-1 РНК или провирусная ДНК не были обнаружены в питательной среде. Из 43 женщин 20 забеременели, и родилось 27 детей. Антитела к ВИЧ, ВИЧ-РНК и провирусная ДНК не были обнаружены ни у женщин ни у детей.

Введение

В середине 1990-ых годов началось широкое применение ВААРТ, и показатель смертности от СПИДа в развитых странах снизился более чем на 80% [1]. ВИЧ-инфекция/СПИД превращаются в контролируемую хроническую инфекцию. Сегодня ВИЧ-инфицированные люди живут дольше. Многие из них создают семьи и хотят иметь детей. Semprini и другие [2] сообщают, что они провели искусственное оплодотворение более чем 2000 ВИЧ-дискордантных пар (ВИЧ-положительный мужчина и ВИЧ-отрицательная женщина) с использованием собственного модифицированного метода всплытия и не отметили ни одного случая передачи ВИЧ-инфекции. Тем не менее, их методика не может считаться оптимальной, поскольку не было доказано полное удаление ВИЧ-РНК и не проводилось определение провирусной ДНК. Zhang и другие [3] сообщают, что ВИЧ может присутствовать в виде провирусной ДНК в семенных клетках ВИЧ-инфицированных мужчин, которые с помощью ВААРТ смогли снизить наличие вирусной РНК в плазме до не выявляемого уровня, и что этот вирус способен к передаче половым путем. До сих пор не установлено, присоединяется ли ВИЧ к сперматозоиду или же сперматозоид инфицируется ВИЧ [4,5]. Поэтому для ВИЧ-дискордантных пар рекомендуется использование контрацепции, даже в тех случаях, когда ВИЧ-РНК в плазме не выявлена [3]. У специалистов из разных стран разное мнение насчет использования вспомогательных методов репродукции с использованием сперматозоидов, полученных методом всплытия [6-8]. ВИЧ-инфицированный мужчина может стать отцом без риска передачи ВИЧ-инфекции в том случае, если из его спермы удастся получить не содержащие ВИЧ сперматозоиды. Целью настоящего исследование было изучение модифицированного метода всплытия для получения не содержащих ВИЧ сперматозоидов с целью их дальнейшего использования во вспомогательных репродуктивных технологиях.

Обсуждение

Это исследование показало, что обнаружение единственной копии ВИЧ-1 РНК или провирусной ДНК представляется возможным, и что ВИЧ-отрицательные сперматозоиды можно получить из спермы ВИЧ-положительных мужчин при использовании центрифугирования в градиенте плотности и методики всплытия. Передача ВИЧ-1 не была отмечена ни у одной из женщин, которым проводилось ЭКО или ИКСИ, и ни у одного из рожденных детей. Некоторые исследования показали, что ВИЧ может привязываться к сперматозоиду и входить в него [4, 5, 12, 13]. Тем не менее, CD4 не проявляются на поверхности сперматоцитов или сперматозоидов [14, 15]. Brogi и другие сообщают, что ВИЧ может присоединяться к наружному гликопротеину сперматозоидов. Считается, что путем передачи ВИЧ-инфекции детям при рождении является путь от матери к ребенку [16], и не существует подтвержденных свидетельств об инфицировании плода через сперматозоиды. Также не было доказано, что сперматид может быть инфицирован ВИЧ в процессе сперматогенеза. Это исследование показало, что сперматозоиды, собранные методом всплытия не были ни инфицированы ВИЧ-1, ни имели присоединенного к ним ВИЧ-1. В сперме содержатся сперматозоиды, семенная плазма, лейкоциты, микробы, металлические кристаллы и др. Если в образце перед процедурой центрифугирования находятся компоненты с большей, чем у сперматозоидов, плотностью, они могут принести с собой вирусы и инфицированные клетки на нижнюю фракцию спермы. Поэтому в своей методике мы оставили разбавленную сперму нетронутой, чтобы дать отстояться тяжелым компонентам, а затем взяли верхнюю фракцию. Если фракцию спермы (нижний слой) после перколярного центрифугирования взять пипеткой через остальные, более плотные слои, что происходит в большинстве случаев, возможно инфицирование ВИЧ сперматозоидов через стенку пипетки или пробирки. В этом исследовании мы запечатали верхнюю часть пробирки после центрифугирования и собрали фракцию спермы, срезав нижний слой, что предотвратило заражение с верхних слоев. Gomibuchi и другие [17] сообщают, что их метод не смог понизить содержание ВИЧ-1 РНК в сперме до <100 копиймл у 55,6% пациентов. Kuji и другие [18] считают, что использование не содержащего эндотоксинов Pureseption при обработке ВИЧ-инфицированной спермы привело к более низкому уровню ВИЧ, чем перколярный метод. Некоторые исследователи использовали методику всплытия, при которой сперматозоиды, собранные после центрифугирования разделяющим раствором, отмывались питательной средой и помещались под этой средой, после чего использовался метод всплытия. Поскольку разница удельного веса суспензии спермы и питательной среды незначительна, ВИЧ и мононуклеарные клетки могут с легкостью рассеяться до верхнего слоя во время применения методики всплытия [17]. Реальные процедуры применения методики всплытия, такие как методика отмывания спермы, использованные при центрифугировании материалы, концентрации разделяющих растворов и используемые при сборе нижнего слоя методы, варьируются от исследования к исследованию [17, 19, 20]. Очевидно, что степень очистки от ВИЧ варьируется. Наш модифицированный метод всплытия обеспечивает гораздо более безопасную процедуру при использовании вспомогательных репродуктивных технологий. Semprini и другие [2] сообщают, что передача ВИЧ не была отмечена ни у одного из более чем 2000 пациентов, которые подверглись искусственному оплодотворению с использованием их метода. Этот успех может быть объяснен тем фактом, что инфекционный ВИЧ встречается менее, чем на 1/10000 всех ВИЧ-вирионов [11, 21, 22] и что удаление всех вырабатывающих ВИЧ мононуклеарных клеток с помощью метода всплытия является решающим фактором в снижении риска инфицирования. Мы сообщали, что одна женщина была инфицирована ВИЧ-1 после шести процедур искусственного оплодотворения с использованием спермы, подготовленной только лишь центрифугированием [23]. Не следует проводить искусственное оплодотворение, когда используются недостаточно эффективные методы очистки, или в тех случаях, когда отсутствие ВИЧ не подтверждено достаточно чувствительными тестами. У большинства ВИЧ-инфицированных пациентов в этом исследовании были низкие показатели количества сперматозоидов и подвижности сперматозоидов, и они дали небольшое количество сперматозоидов после применения метода всплытия. По мере того, как мы стараемся достичь более высоких показателей очистки, число полученных сперматозоидов становится все меньшим. Ohl и другие [24] не отметили ни одного случая беременности после искусственного оплодотворения с использованием спермы, полученной с использованием метода всплытия. Если на процедуру ПЦР уходит слишком много времени, или в том случае, когда сперматозоиды подвергаются заморозке, их способность к оплодотворению снижается и, соответственно, вероятность наступления беременности становится ниже. Быстрое подтверждение полного очищения сперматозоидов от ВИЧ-1 РНК и провирусной ДНК для использования вспомогательных репродуктивных методов представляет трудности. CD4 и хемокинные рецепторы не проявляются на яйцеклетке [25], и, таким образом, яйцеклетка не может быть инфицирована ВИЧ в суспензии спермы, собранной с использованием метода всплытия, даже тогда, когда ВИЧ присутствует в суспензии. Если суспензия инфицирована небольшим количеством ВИЧ, инфективность ВИЧ все равно будет ниже 1/10 после двухдневной инкубации. К тому же использование ЭКО или ИКСИ предоставляет возможность подтвердить отсутствие ВИЧ-1 в питательной среде оплодотворенной яйцеклетки до переноса эмбриона. Поэтому мы проводили ЭКО или ИКСИ с использованием замороженных сперматозоидов, в которых ВИЧ-1 обнаружен не был. В заключение: мы показали, что из спермы ВИЧ-инфицированных мужчин можно получить сперматозоиды с доказанным отсутствием в них ВИЧ-1 РНК или провирусной ДНК. Какой бы метод подготовки спермы к ВРТ не использовался, необходимо подтвердить отсутствие ВИЧ-1 РНК и провирусной ДНК в сперме, используемой для ВРТ с применением самых чувствительных тестов.

Методы

Настоящее клиническое исследование было одобрено комитетами по этике Университета Ниигата, больницы Огикубо, Университета Кейо и Университета Киорин. Все пары посещали гематологическое отделение больницы Огикубо и получили консультации и объяснения клинического исследования. Информированное согласие было получено от всех пар, согласившихся на участие в исследовании. Сперма была получена путем мастурбации. Проводилась спермограмма и оценивалась морфология сперматозоидов. Подготовка к перколированию. Изотонический раствор Перкола (Amersham Life Science, Токио, Япония) был приготовлен путем растворения 980 гр. Перкола в 10,0 мл 2,0 мол/л Hepes-NaOH, pH 7,4, 10,0 мл сывороточного альбумина человека (25%), 0,05 гр. фосфомицина и 0,05 гр. кефаротина. Получившийся в результате 98-процентный перкольный раствор был стерилизован фильтром Millipore (размер поры - 0,45 Nm). Предварительная обработка спермы. Эта процедура показана на схеме 1. Семенная жидкость была дважды разбавлена раствором Хэнкса, после чего в течение 10 минут отстаивалась в тестовой пробирке, чтобы осадить фильтрующиеся микрочастицы. Затем пропущена через ART-фильтр (коэффициент очищения - 20 Nm; ART-фильтр, Nipro, Осака, Япония), чтобы удалить волокна, микрочастицы и слизеобразующие остатки. Верхняя фаза суспензии спермы была наслоена на 6 мл Перкола с градиентом 98%, 30% в центрифужной пробирке (Nipro) и центрифугирована на 400 Cгр. в течение 30 минут. Центрифужная пробирка была сделана из стекла и ее дно было сжато для того, чтобы минимизировать уровень осадка. Для забора сперматозоидов осевших на дне пробирки верхняя ее часть была заткнута резиновой заглушкой, а средняя часть сжатого дна была отсечена резчиком для ампул. Подвижные сперматозоиды были отделены модифицированным плавающим методом. Капилляр из тонкого стекла был введен в 2 мл среды в пузырьке, затем на дно через внутренний капилляр опустили кончик иглы. Подвижные сперматозоиды всплывали при 37 ?C в инкубаторе с 5-процентным содержанием CO2 в воздухе. Через 60 минут был собран 1 мл верхнего слоя, содержащего всплывшие сперматозоиды. Суспензия была разделена на две части. Одна использовалась для определения уровня содержания ВИЧ, а другая - криоконсервирована средой KS-II [9] в контейнере с жидким азотом. Стандартные материалы ВИЧ-1. Клетки MOLT-4, инфицированные ВИЧ-LAI и его супернатантной культурой, использовались в качестве стандартов для ВИЧ-1-инфицированных клеток и штамма вируса, соответственно. Очищенная от штамма вируса РНК и плазмида pNL4-3 [10] явились стандартами для ВИЧ-1 РНК и ДНК, соответственно. Концентрация стандартной ВИЧ-1 РНК и ДНК была установлена с помощью спектрофотометрии and the null-class equation of the Poisson distribution of the reverse transcriptase (RT)-nested полимеразной цепной реакции. Подсчет клеток производился с использованием гемоцитометра Буркера-Турка (Emergo, Landsmeer, Голландия). Концентрация вирионов была принята за половину концентрации вирусной РНК. Обнаружение ВИЧ-1 РНК и ДНК. Образцы суспензии спермы, питательной среды или плазмы были центрифугированы при 35 500 C гр. в течение одного часа при 4B0C. РНК и ДНК были получены из осадка с использованием QIAamp UltraSens Virus Kit (Qiagen, Токио, Япония). Одна четвертая элюата была протестирована в четырех экземплярах с помощью вложенной ОТ ЦРП. Реакция обратной транскриптазы (ОТ) была проведена путем инкубации при 42B0C в течение 10 минут в 20 N Весь получившийся в результате ОТ продукт был подвергнут первому циклу ЦРП в 50 N< грмл бромида этидия, а затем их сфотографировали под ультрафиолетовым освещением. В течение всей процедуры среда, использовавшаяся для обмытой спермы или оплодотворенной яйцеклетки, была отрицательной, а эта среда с 10 добавленными вирионами - положительной. На весь процесс ушло приблизительно 5 часов. Для образцов периферийных мононуклеарных клеток крови (ПМКК) при помощи QIAamp DNA Kit (Qiagen) была получена ДНК, и 0.5 N< гр. ДНК были протестированы в тройном экземпляре процедурами ЦРП без использования обратной транскрипции. Конкурентная ЦРП с вложенной ОТ была проведена так, как описано выше (11). Инфекционность ВИЧ-1 во время инкубации. После инкубации при 37B0 C с содержанием CO2 ниже 5% в течение различных периодов времени штамм вируса был добавлен в 5 C 106 стимулированных донорских ПМКК в 1 мл RPMI 1640 среды, в которую было добавлено 30% фетальной телячьей сыворотки и 70 U мл рекомбинантного интерлейкина-2 человека (Shionogi, Осака, Япония), после чего все это хранилось в инкубаторе в течение 5 дней. Супернатанты культуры были протестированы на концентрацию p24 при помощи VIDAS HIV P24 II (BioMC)rieux, Токио, Япония).

Клиническое исследование

Если анализ ВИЧ-1 на РНК вирионов и провирусную ДНК давал отрицательный результат, для использования при поддерживающей репродуктивной методике размораживали следующую часть спермы. Созревшую яйцеклетку получали с помощью препаратов, вызывавших овуляцию, и затем помещали ее в чашку, в которой содержалось 3 мл RPMI питательной среды (20% альбумин). ВИЧ-1-отрицательный раствор спермы вводился в яйцеклетку путем экстракорпорального оплодотворения (ЭКО) или интрацитоплазмической инъекции спермы (ИИС). Перенос эмбриона производился только после того, как анализы на ВИЧ-1 РНК и ДНК вложенной ЦРП давали отрицательный результат. Все женщины, прошедшие поддерживающую репродуктивную терапию, даже те, кто не сумел забеременеть, проверялись на антитела к ВИЧ, ВИЧ-1 РНК и провирусную ДНК в крови на 1 и 3 месяцах после применения поддерживающей репродуктивной технологии и после родов. Младенцы проверялись на РНК ВИЧ и провирусную ДНК в крови пуповины при рождении и в крови до 6 месяцев после рождения.

Результаты

Чувствительность анализа на ВИЧ-1 РНКДНК. Процедура обнаружения единственной копии либо РНК вириона ВИЧ-1, либо провирусной ДНК в суспензии спермы (анализ на РНК ВИЧ-1ДНК) была разработана путем отбора и усовершенствования технологий на трех главных стадиях (сбор вирионов ВИЧ-1 и инфицированных клеток центрифугированием, получение вирусной РНК и ДНК с помощью silica-gel-membrane технологии, обнаружение вирусной РНК и ДНК вложенной ЦРП), чтобы добиться нулевой вероятности потери на каждой стадии. Сначала, с помощью прямой ЦРП вложенной ОТ в конечном растворении с использованием уравнения распределения Пуассона нулевого класса было установлено точное количество концентрации вирионов в стандартном штамме вируса. Затем один вирион ВИЧLAI, в среднем, был добавлен в 1мл среды ЭКО Сиднея (Cook, Токио, Япония), что послужило началом для всей процедуры. Когда с помощью ЦРП вложенной ОТ была изучена одна четвертая элюата из экстракционной колонны (что повторилось четыре раза), в 12 из 20 образцов на четыре реакции был обнаружен по меньшей мере один диск (см. Таблицу 2). Далее, единственная клетка MOLT-4, хронически инфицированная ВИЧLAI, была добавлена в 1 мл среды ЭКО Сиднея и затем подвергнута анализу на ВИЧ-1 РНКДНК без обратной транскрипции. ЦРП вложенной ОТ показала, что в 6 из 10 образцов обнаружена положительная реакция. Процентные показатели положительных реакций для вирионов (60%) и инфицированных клеток (60%) находились в близком согласии с цифрами, полученными с помощью уравнения распределения Пуассона (63%), что явилось доказательством того, что можно определить наличие РНКДНК в единственном вирионе, так же как в единственной инфицированной клетке, когда они присутствуют в 1мл среды ЭКО. Чтобы исследовать влияние присутствия спермы в среде на чувствительность анализа, были проведены два ряда тестов из пяти образцов, содержащих 0.5, 1, 2, 4 и 8 C 106мл сперматозоидов в среде ЭКО Сиднея; один ряд был составлен из 50 вирионов, а другой - из 100 инфицированных клеток. Количество РНК вирионов и провирусной ДНК из образцов с содержанием спермы, определенное конкурентной ЦРП, варьировалось в пределах от 75 до 112 копий (2 копии РНКвирион) и от 96 до 112 копий, соответственно, таким образом, который не зависел от количества спермы. Эти результаты дают возможность предположить, что протокол может обнаружить единственный вирион или инфицированную клетку даже в присутствии до 8 C 106 сперматозоидов в одном образце. Удаление вирионов ВИЧ-1 и инфицированных клеток из смешанной спермы с помощью обмывания (или промывания??) спермы. Чтобы произвести оценку эффективности процедур обмывания спермы перколярным центрифугированием в градиенте плотности применения плавающей методики для удаления ВИЧ-1 из спермы, вирионы ВИЧ-1 или ВИЧ-1-инфицированные клетки были добавлены в сперму здоровых доноров. Когда 2 C 107 вирионов ВТЧ-1 были смешаны с 1.6 мл спермы здоровых доноров, содержащей 6.3 C 107 сперматозоидовмл, после центрифугирования было обнаружено 63 копии ВИЧ-1 РНК, но после применения плавающей методики ВИЧ-1 РНК не было обнаружено. Когда 5 C 105 ВИЧ-1-инфицированных клеток были смешаны с 1.6 мл спермы здоровых доноров, содержащей 6.3 C 107 сперматозоидовмл, ВИЧ-1 ДНК не была обнаружена ни после центрифугирования, ни после применения плавающей методики. Суспензия спермы, собранная после плавающей методики, равнялась 1.0 мл и содержала 50 000 сперматозоидов 100-процентной подвижности. Ослабление инфекционности ВИЧ-1 во время инкубации. Вирусный раствор ВИЧ-LAI подвергался инкубации в питательной среде на различные промежутки времени, и в стимулированных ПМКК была измерена их способность к производству p24, чтобы дать оценку стабильности ВИЧ-1 в искусственных условиях в отношении к инфективности. Инфективность снизилась semiexponentially (ПОЛУЭКСПОНЕНЦИАЛЬНО??), и период полураспада составлял приблизительно 13 часов.

Результаты исследования

В настоящем исследовании принимали участие 52 ВИЧ-положительных человека (см. таблицу 1), из них 29 были инфицированы через кровь, 23 -половым путем. Средний возраст составил 33 года (от 27 до 44 лет) у 16 не проходивших лечения пациентов, 34 года (от 28 лет до 41 года) у получавших антиретровирусную терапию пациентов с вирусной нагрузкой <50 копий/мл и 32 года (от 20 лет до 51 года) у получавших HAART пациентов с вирусной нагрузкой <50 копий/мл. Средняя вирусная нагрузка в плазме составляла 17500 копий/мл (от 70-100000) в не получавшей лечение группе пациентов, и 1500 копий/мл (от 54-31000) у получавших лечение пациентов, вирусная нагрузка которых составляла <50 копий/мл. Среди 48 пациентов, средняя вирусная нагрузка в плазме составляла 17500 копий/мл (от 70-100000) у 15 пациентов в не получавшей лечение группе, 4800 копий/мл (от 54-31000) у 10 получавших антиретровирусную терапию пациентов с вирусной нагрузкой <50 копиймл, и < 50 копий/мл у 23 получавших HAART пациентов. Среднее число CD4 составляло 365 клеток/ N<50 копий/мл и 399 клеток/ N< 50 копий/мл. Среднее количество сперматозоидов у ВИЧ-положительных мужчин составляло 47х106/мл (от 0 до 82) в не получавшей лечение группе, 41 х106/мл (от 0 до 65) у получавших антиретровирусную терапию пациентов с вирусной нагрузкой < 50 копий/мл и 35 х106/мл (от 0 до 120) у получавших HAART пациентов с вирусной нагрузкой <50 копий/мл. Азооспермия была выявлена у четырех пациентов, которые в данное исследование включены не были. У всех пациентов средний показатель подвижности сперматозоидов составлял 28%, а средний процент морфологически нормальных сперматозоидов равнялся 12%. Средняя концентрация сперматозоидов у пациентов (за исключением четырех пациентов с азооспермией) составляла 42 х106/мл (от 3 до 120), и 52 х106/мл (от 0 до 170) сперматозоидов было получено методом перколярного центрифугирования. Средний показатель подвижности сперматозоидов равнялся 28% и 45% до и после метода перколяции, соответственно. После использования метода всплытия количество сперматозоидов составляло 1,5х106/мл (от 0 до 11), а показатель подвижности равнялся 100%. Методом всплытия удалось получить сперматозоиды из 73 образцов спермы у 48 пациентов. ВИЧ-1 РНК или провирусная ДНК не были обнаружены ни в одном случае. ВИЧ-1-отрицательная сперма использовалась для ЭКО у 12 пар и ИКСИ у 31 пары. ВИЧ-1 РНК или провирусная ДНК не были обнаружены в питательной среде. Из 43 женщин 20 забеременели, и родилось 27 детей. Антитела к ВИЧ, ВИЧ-РНК и провирусная ДНК не были обнаружены ни у женщин ни у детей.

http://www.itpcru.org/


 Новости

« Март ´17 »
ПВСЧПСВ
  12345
6789101112
13141516171819
20212223242526
2728293031
26


Партнеры




Vox populi - vox dei

Хотите ли Вы принимать участие в коротких интернет-опросах на медицинскую тематику?

Да
Нет


Результаты предыдущих голосований

В каком виде Вы предпочитаете читать книги по медицине?

 Только бумажные издания - 35 [12%]

 Предпочитаю бумажные, но согласен и в электронном виде - 94 [33%]

 Мне все-равно электронные или бумажные, лишь бы полезные - 101 [36%]

 Предпочитаю электронные, потому, что они дешевле бумажных аналогов - 51 [18%]


Всего голосов: 282




Medicus Amicus - это медицинский сайт, фотосайт, психологический сайт,
сайт постоянного медицинского образования, медицинская газета и даже медицинский журнал.
Все замечания и пожелания присылайте используя форму обратной связи
Все права защищены и охраняются законом.
© 2002 - 2017 Rights Management
Автоматизированное извлечение информации сайта запрещено.
Подробности об использовании информации, представленной на сайте
в разделе "Правила использования информации"